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罗丹明标记麦胚凝集素 蛋白纯化
简要描述:
罗丹明标记麦胚凝集素 蛋白纯化麦胚凝集素(Wheat Germ Agglutinin,WGA)是广泛应用于细胞生物学的凝集素之一。WGA识别的糖类受体是N-乙酰葡糖胺(GlcNAc),倾向与N-乙酰葡糖胺的二聚体和三聚体结合。
产品时间:2024-07-08
Rhodamine-WGA (Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin)
罗丹明标记麦胚凝集素
产品标签
Rhodamine-WGA 小麦胚芽凝集素;FITC-WGA 麦胚凝集素;Plasma membrane 质模标记;Golgi apparatus 高尔基体染色;Yeast bud scars 酵母出芽痕;
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Rhodamine-WGA (Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin) 罗丹明标记麦胚凝集素 | MP6326-1MG | 1mg | 995 |
Rhodamine-WGA (Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin) 罗丹明标记麦胚凝集素 | MP6326-5MG | 5mg | 3895 |
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产品描述
麦胚凝集素(Wheat Germ Agglutinin,WGA)是广泛应用于细胞生物学的凝集素之一。WGA识别的糖类受体是N-乙酰葡糖胺(GlcNAc),倾向与N-乙酰葡糖胺的二聚体和三聚体结合。WGA能结合含N-乙酰葡糖胺末端或壳二糖的寡糖,这类结构在许多血清和膜来源糖蛋白中普遍存在。细菌细胞壁肽聚糖、甲壳素(几丁质)、软骨糖胺聚糖和糖脂也能结合WGA。天然WGA还能通过N-乙酰神经氨酸(唾液酸)残基与一些糖蛋白相互作用。WGA适用于胰岛素受体的纯化、血清蛋白和神经示踪。
麦胚凝集素(Wheat Germ Agglutinin,WGA)通常用来标记糖蛋白,用于活细胞或固定细胞的质膜成像,用于组织切片染色或其它标准的免疫分析实验。WGA能用作一种革兰氏染色剂,荧光标记革兰氏阳性菌(非革兰氏阴性菌)。还能用于结合出芽酵母(比如酿酒酵母)的出芽痕。
本品是罗丹明标记的麦胚凝集素(Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin, Rhodamine-WGA),Ex/Em= 550/575nm,亲和纯化所得,基本不含未标记的荧光素。建议工作浓度范围是5-20μg/ml。
产品特性
1) 英文同义名:Wheat Germ Agglutinin, Rhodamine Conjugate; Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin; Wheat germ agglutinin lectin, Rhodamine Conjugate; Rhodamine labeled WGA Lectin;
2) 中文同义名:麦胚凝集素,罗丹明标记;罗丹明标记的麦胚凝集素;罗丹明标记的小麦胚芽凝集素;
3) 糖类特异性:N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)
4) 外观:溶液(溶于10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.5, containing 0.1 mM Ca2+, 0.08% sodium azide, 25mM N-acetylglucosamine)
5) 蛋白浓度:5mg/ml
6) Ex/Em:550/575nm
7) 抑制和/或洗脱糖类:400mM N-乙酰葡糖胺
8) 应用:IF、糖生物学
保存与运输方法
保存:2-8℃避光保存,至少1年有效。
运输:冰袋运输。
注意事项
1) 本品置于2-8℃长期保存可能会产生沉淀,使用前请37℃温育数分钟,之后离心吸取上清使用。此操作基本不会对产生性能造成负影响。
2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
质膜标记操作流程
一、标记活的真核细胞
以下是对贴壁培养在盖玻片上的活细胞的通用染色步骤。以下步骤使用HBSS溶液对哺乳动物细胞进行优化染色。根据不同的模型系统和预期效果来优化染色时间和浓度。
1.1 制备染色工作液:用HBSS(无酚红)稀释罗丹明-WGA(5mg/ml)到工作浓度,常用工作浓度范围为5-20μg/ml。使用细胞培养基稀释WGA偶联物用于标记可能导致增高的非细胞染色背景。
1.2 细胞标记:加入足量的染色工作液完quan覆盖盖玻片上的细胞。37℃孵育10min。
1.3 细胞清洗:标记结束后,吸走染色工作液,用合适的缓冲液清洗细胞2次。除非细胞要做固定,此时即可在预热的HBSS或其它适合于成像的缓冲液中封片。
1.4 【可选】细胞固定:可能用4%多聚甲醛固定染色好的细胞,37℃ 15min,之后用缓冲液清洗,以及做另一种复染。如有必要用0.2% Triton X-100透化细胞。
二、标记固定的真核细胞
以下是对贴壁培养、甲醛固定且未做透化处理细胞的通用染色步骤。根据不同的模型系统和预期效果来优化染色时间和浓度。
2.1细胞固定
2.2 细胞清洗:
2.3 准备染色工作液
2.4 细胞标记
2.5 细胞清洗
2.6 细胞成像
应用示例
1)文献来源:Héctor M et al. Recognition and Blocking of Innate Immunity Cells by Candida albicans Chitin. Infection and Immunity Apr 2011, 79 (5) 1961-1970; DOI: 10.1128/IAI.01282-10
实验对象:Candida albicans 白色念珠菌
实验方法:Cells were harvested by low-speed centrifugation, washed twice with sterile PBS, stained with either 25 μg/ml calcofluor white (CFW) or 100 μg/ml fluorescein isothiocyanate-conjugated wheat germ agglutinin (WGA-FITC) and examined by phase differential interference contrast (DIC) and fluorescence microscopy using a Zeiss Axioplan 2 microscope.
实验结果:
Fig 1. Staining of chitin in C. albicans wild-type (CAF2-1) and chs3Δ null mutant cells by using calcofluor white (A) and the fluorescent lectin WGA-FITC (B). The former stain detects chitin in all cells, while WGA is able to bind to accessible chitin only at the cell surface.
2)文献来源:K. Stamer et al. Tau blocks traffic of organelles, neurofilaments, and APP vesicles in neurons and enhances oxidative stress. J Cell Biol. 2002 Mar 18; 156(6): 1051–1063. doi: 10.1083/jcb.200108057
实验对象:Chick retinal ganglion neurons 鸡视网膜神经节神经元
实验方法:For observing vesicles labeled with fluorescent lectins, cells at day 4 in culture were incubated with rhodamine-WGA at a final concentration of 4 μg/ml for 15 min. Vesicles were tracked with an Axioplan fluorescence microscope (ZEISS). To visualize CFP fluorescence of CFP-htau40, the FITC filter set was employed; WGA-rhodamine–labeled vesicles were observed by using the TRITC filter set.
Fig 2. Transport of Golgi-derived vesicles in chick retinal ganglion neurons. The growth cone is on the right (outside the picture frame). (A) After 2 d in culture, RGCs were stained with WGA, and movements of vesicles were monitored by confocal microscopy. The arrowheads point to an example of a retrogradely moving particle at 1.2 μm/s. (B) After 2 d in culture, RGCs were transfected with CFP-tau, and 2 d later they were stained with WGA. The tau-expressing axon (top, blue) contains almost no WGA-stained vesicles; one of the rare retrograde movements is indicated by arrows (0.7 μm/s; middle and bottom). By contrast, the axon not overexpressing tau (double arrows) contain numerous mobile particles.
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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