罗丹明标记麦胚凝集素 蛋白纯化

Rhodamine-WGA (Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin)

罗丹明标记麦胚凝集素

产品标签

Rhodamine-WGA 小麦胚芽凝集素；FITC-WGA 麦胚凝集素；Plasma membrane 质模标记；Golgi apparatus 高尔基体染色；Yeast bud scars 酵母出芽痕；

产品信息

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产品描述

麦胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）是广泛应用于细胞生物学的凝集素之一。WGA识别的糖类受体是N-乙酰葡糖胺（GlcNAc），倾向与N-乙酰葡糖胺的二聚体和三聚体结合。WGA能结合含N-乙酰葡糖胺末端或壳二糖的寡糖，这类结构在许多血清和膜来源糖蛋白中普遍存在。细菌细胞壁肽聚糖、甲壳素（几丁质）、软骨糖胺聚糖和糖脂也能结合WGA。天然WGA还能通过N-乙酰神经氨酸（唾液酸）残基与一些糖蛋白相互作用。WGA适用于胰岛素受体的纯化、血清蛋白和神经示踪。

麦胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）通常用来标记糖蛋白，用于活细胞或固定细胞的质膜成像，用于组织切片染色或其它标准的免疫分析实验。WGA能用作一种革兰氏染色剂，荧光标记革兰氏阳性菌（非革兰氏阴性菌）。还能用于结合出芽酵母（比如酿酒酵母）的出芽痕。

本品是罗丹明标记的麦胚凝集素（Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin, Rhodamine-WGA），Ex/Em= 550/575nm，亲和纯化所得，基本不含未标记的荧光素。建议工作浓度范围是5-20μg/ml。

产品特性

1） 英文同义名：Wheat Germ Agglutinin, Rhodamine Conjugate; Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin; Wheat germ agglutinin lectin, Rhodamine Conjugate; Rhodamine labeled WGA Lectin;

2） 中文同义名：麦胚凝集素，罗丹明标记；罗丹明标记的麦胚凝集素；罗丹明标记的小麦胚芽凝集素；

3） 糖类特异性：N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）

4） 外观：溶液（溶于10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.5, containing 0.1 mM Ca²⁺, 0.08% sodium azide, 25mM N-acetylglucosamine）

5） 蛋白浓度：5mg/ml

6） Ex/Em：550/575nm

7） 抑制和/或洗脱糖类：400mM N-乙酰葡糖胺

8） 应用：IF、糖生物学

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 本品置于2-8℃长期保存可能会产生沉淀，使用前请37℃温育数分钟，之后离心吸取上清使用。此操作基本不会对产生性能造成负影响。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

质膜标记操作流程

一、标记活的真核细胞

以下是对贴壁培养在盖玻片上的活细胞的通用染色步骤。以下步骤使用HBSS溶液对哺乳动物细胞进行优化染色。根据不同的模型系统和预期效果来优化染色时间和浓度。

1.1 制备染色工作液：用HBSS（无酚红）稀释罗丹明-WGA（5mg/ml）到工作浓度，常用工作浓度范围为5-20μg/ml。使用细胞培养基稀释WGA偶联物用于标记可能导致增高的非细胞染色背景。

1.2 细胞标记：加入足量的染色工作液完quan覆盖盖玻片上的细胞。37℃孵育10min。

1.3 细胞清洗：标记结束后，吸走染色工作液，用合适的缓冲液清洗细胞2次。除非细胞要做固定，此时即可在预热的HBSS或其它适合于成像的缓冲液中封片。

1.4 【可选】细胞固定：可能用4%多聚甲醛固定染色好的细胞，37℃ 15min，之后用缓冲液清洗，以及做另一种复染。如有必要用0.2% Triton X-100透化细胞。

二、标记固定的真核细胞

以下是对贴壁培养、甲醛固定且未做透化处理细胞的通用染色步骤。根据不同的模型系统和预期效果来优化染色时间和浓度。

2.1细胞固定

2.2 细胞清洗：

2.3 准备染色工作液

2.4 细胞标记

2.5 细胞清洗

2.6 细胞成像

应用示例

1）文献来源：Héctor M et al. Recognition and Blocking of Innate Immunity Cells by Candida albicans Chitin. Infection and Immunity Apr 2011, 79 (5) 1961-1970; DOI: 10.1128/IAI.01282-10

实验对象：Candida albicans 白色念珠菌

实验方法：Cells were harvested by low-speed centrifugation, washed twice with sterile PBS, stained with either 25 μg/ml calcofluor white (CFW) or 100 μg/ml fluorescein isothiocyanate-conjugated wheat germ agglutinin (WGA-FITC) and examined by phase differential interference contrast (DIC) and fluorescence microscopy using a Zeiss Axioplan 2 microscope.

实验结果：

Fig 1. Staining of chitin in C. albicans wild-type (CAF2-1) and chs3Δ null mutant cells by using calcofluor white (A) and the fluorescent lectin WGA-FITC (B). The former stain detects chitin in all cells, while WGA is able to bind to accessible chitin only at the cell surface.

2）文献来源：K. Stamer et al. Tau blocks traffic of organelles, neurofilaments, and APP vesicles in neurons and enhances oxidative stress. J Cell Biol. 2002 Mar 18; 156(6): 1051–1063. doi: 10.1083/jcb.200108057

实验对象：Chick retinal ganglion neurons 鸡视网膜神经节神经元

实验方法：For observing vesicles labeled with fluorescent lectins, cells at day 4 in culture were incubated with rhodamine-WGA at a final concentration of 4 μg/ml for 15 min. Vesicles were tracked with an Axioplan fluorescence microscope (ZEISS). To visualize CFP fluorescence of CFP-htau40, the FITC filter set was employed; WGA-rhodamine–labeled vesicles were observed by using the TRITC filter set.

Fig 2. Transport of Golgi-derived vesicles in chick retinal ganglion neurons. The growth cone is on the right (outside the picture frame). (A) After 2 d in culture, RGCs were stained with WGA, and movements of vesicles were monitored by confocal microscopy. The arrowheads point to an example of a retrogradely moving particle at 1.2 μm/s. (B) After 2 d in culture, RGCs were transfected with CFP-tau, and 2 d later they were stained with WGA. The tau-expressing axon (top, blue) contains almost no WGA-stained vesicles; one of the rare retrograde movements is indicated by arrows (0.7 μm/s; middle and bottom). By contrast, the axon not overexpressing tau (double arrows) contain numerous mobile particles.

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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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