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Caspase-9活性检测试剂盒 细胞增殖
简要描述:
Caspase-9活性检测试剂盒 细胞增殖 Caspases(Cysteine-requiringAspartate Proteases)是一个高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特异性识别底物中的天冬氨酸残基,在介导细胞凋亡的过程中发挥着非常重要的作用。
产品时间:2024-05-29
Caspase-9 Activity Assay Kit (Colorimetric)
Caspase-9活性检测试剂盒(比色法)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Caspase-9活性检测试剂盒(比色法) | MX3229-20T | 20T | 880 |
Caspase-9活性检测试剂盒(比色法) | MX3229-100T | 100T | 2950 |
产品描述
Caspases(Cysteine-requiringAspartate Proteases)是一个高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特异性识别底物中的天冬氨酸残基,在介导细胞凋亡的过程中发挥着非常重要的作用。Caspases以潜在酶原的形式表达,通过自发蛋白分解机制或经其他蛋白酶(通常是其他caspases)加工处理的方式被活化。人caspases可细分为三大功能组:细胞因子活化(caspase-1,-4,-5和-13),凋亡启动(caspase-2,-8,-9和-10)和凋亡执行(caspase-3,-6和-7)。
Caspase-9(Caspase 9),也称为Mch6,ICE LAP6和Apaf3,作为caspases家族的成员之一,含CARD结构域(caspase募集结构域),是细胞凋亡信号转导过程中比较上游的一个caspase。Caspase-9酶原分子量约47kDa,存在于胞浆内,一旦活化,转移到线粒体。Caspase-9参与caspase活化级联,负责凋亡执行,和切割/活化下游的caspase-3和caspase-6。当募集到Apaf1/细胞se素c复合物后,caspase-9被激活。Caspase-9的激活可通过磷酸化进行调控。
Caspase-9活性检测试剂盒(比色法)(Caspase-9 Activity Assay Kit, Colorimetric or Caspase-9 Colorimetric Assay Kit)以偶联上发色基团pNA的caspase-9序列特异性的多肽为底物。当底物被caspase-9剪切后,发色基团被释放出来,进而用酶标仪或分光光度计来测定其吸光值(λ=405nm或400nm)。通过计算OD凋亡诱导组/OD阴性对照组的比值来确定凋亡诱导组caspase-9的活化程度。
本品适用于培养细胞以及新鲜组织的caspase-9活性检测。
产品包装
编号 | 组分名称 | 保存方法 | 货号(规格) | |
MX3229-20T | MX3229-100T | |||
MX3229-A | Lysis Buffer裂解缓冲液 | 2-8℃ | 5ml | 20ml |
MX3229-B | 2× Reaction Buffer 2×反应缓冲液 | 2-8℃ | 1ml | 5ml |
MX3229-C | Caspase-9 Substrate Caspase-9底物 | -20℃避光 | 100μl | 500μl |
MX3229-D | 0.1M DTT | -20℃避光 | 60μl | 250μl |
保存与运输方法
保存:-20℃保存,1年有效。开盒后置Lysis Buffer和2× Reaction Buffer于2-8℃保存。Caspase-9Substrate和0.1M DTT需要避光冻存。
运输:冰袋运输。
注意事项
1) Caspase-9 Substrate需避光保存和使用。
2) 某些凋亡诱导剂诱导的凋亡可能通过caspase-9非依赖的方式进行,此种情况使用本品检测的caspase-9活性无明显变化,则,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3) 起始细胞数量需达3~5×106个或新鲜组织量达50~100mg,以保证达到测定所需的100~200μg蛋白量。Caspase-9的活性与细胞裂解后的蛋白含量有关,如测定的OD值偏低,可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。
4) 优先选择测定λ=405nm的吸光值;如有困难,再测定λ=400nm的吸光值。
5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1.需要的其他试剂和材料
仪器:低温高速离心机、酶标仪或分光光度计(100μl的比色皿)(λ=405nm或400nm)、微量移液器、玻璃匀浆器(组织样本)
耗材:1.5ml微量离心管、96孔酶标板(透明)或100μl的比色皿
试剂:PBS、蛋白定量试剂(比如:Bradford法蛋白浓度测定试剂盒)
2.试剂准备
2.1 Lysis Buffer(含DTT)
于实验前,按每50μl Lysis Buffer 加入0.5μl DTT的比例准备足量的裂解工作液,置于4℃或冰上待用。
2.2 2×Reaction Buffer(含DTT)
于使用前,按每50μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl DTT的比例准备足量的反应工作液。
3.样本准备
3.1 细胞裂解
a)用合适方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性对照组(不加诱导剂),收集3~5×106个细胞。
b)PBS洗涤细胞2次(2000rpm,离心5min),尽量吸尽PBS上清。
c)往离心的沉淀细胞中加入15~200μl预冷的Lysis Buffer(含DTT),吹打混匀。
d)置冰上裂解20~60min,其间涡旋振荡3~4次,每次10s;或冻融2~3次。
e)4℃,10,000rpm离心1min。
f)小心吸取上清(含裂解释放的蛋白质)转移到新的EP管内,置于冰上待用。
g)取少量上清(1~2μl),用常规方法(Bradford法)测定蛋白浓度。
3.2 组织裂解
a)取50~100mg组织置于培养皿内,用手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入150~200μl预冷的Lysis Buffer(含DTT),用玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作。
b)将组织匀浆液转移到1.5ml预冷的离心管,10,000rpm,4℃离心5min。
c)小心吸取上清(含裂解释放的蛋白质)转移到新的EP管内,置于冰上待用。
d)取少量上清(1~2μl),用常规方法(Bradford法)测定蛋白浓度。
4.Caspase-9活性检测
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