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Chemically 大肠杆菌 生化试剂
简要描述:
Chemically 大肠杆菌 生化试剂,Chemically 大肠杆菌化学感受态细胞TG1来源于E. coli K-12菌株,是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株。F′附加体上的lacIq的存在使其能严谨型调控表达含大肠杆菌启动子(由lac操纵子序列控制,比如:T5,trc,tac)的载体。。
产品时间:2024-03-21
TG1 Chemically Competent Cell
大肠杆菌化学感受态细胞
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产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
TG1 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 | MF2327-1000UL | 10×100μl | 410 |
MF2327-5000UL | 50×100μl | 1730 |
菌株描述
TG1来源于E. coli K-12菌株,是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株。F′附加体上的lacIq的存在使其能严谨型调控表达含大肠杆菌启动子(由lac操纵子序列控制,比如:T5,trc,tac)的载体。TG1是常用的噬菌体展示用菌株,也适用于普通质粒的构建,lacIqZΔM15的存在使其可用于蓝白斑筛选等实验。
TG1菌株基因型:F’ [traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15] supE thi-1 Δ(mcrB-hsdSM)5(rK-mK-) Δ(lac-proAB)
产品描述
本品是大肠杆菌TG1菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
组分名称 | 货号(规格) | ||
MF2327-1000UL | MF2327-5000UL | ||
MF2327-A | TG1 Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2327-B | Control Vector puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
保存与运输条件:
保存:-80℃保存,六个月有效。
运输:干冰运输。
注意事项
1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。
2) 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最*-低。
5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
6) 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取,推荐选用TB培养基(Terrific Broth),优于LB或SOC。
7) TG1菌株不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,质粒提取时,推荐使用质粒提取试剂盒中的去蛋白液,为求去除菌体内大量的核酸酶。
8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。
2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜(12-15h)。
【注意】:
a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。原则是以在平板上能挑到单克隆菌落为宜。
b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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